试剂
(1) 磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)
取磷酸氢二钠71.64g,加水使溶解成1000ml,作为甲液。另取磷酸二氢钠27.60g,加水使溶解成1000ml,作为乙液。取甲液81ml与乙液19ml,混匀,调节pH值至7.3。
(2) 磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)
取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)500ml,加水稀释成1000ml,调节pH值至7.3。
(3) 磷酸盐缓冲液(0.02mol/L)
取磷酸盐缓冲液 (0.2mol/L) 100ml,加水稀释成1000ml,调节pH值至7.3。
(4) 琥珀酸盐溶液
取琥珀酸与氢氧化钾各4.72g,加水使溶解成100ml,调节pH值至7.3。
(5) 氰化钾溶液 取氰化钾0.65g,加水使溶解成100ml后,用稀硫酸调节pH值至7.3。
(6) 去细胞色素C的心悬浮液
取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)5ml、琥珀酸盐溶液1.0ml与供试品溶液0.5ml(如系还原型制剂,应加入0.01mol/L铁氰化钾溶液0.05ml),置25ml具塞比色管中,加去细胞色素C的心悬浮液0.5ml与氰化钾溶液1.0ml,加水稀释至10ml,摇匀,以同样的试剂作空白,照分光光度法(附录Ⅳ A),在550nm的波长处附近,间隔0.5nm找出最大吸收波长,并测定吸收度,直至吸收度不再增大为止,作为酶还原吸收度;然后各加连二亚硫酸钠约 5mg,摇匀,放置约10分钟,在上述同一波长处测定吸收度,直至吸收度不再增大为止,作为化学还原吸收度;按下式计算。
酶还原吸收度
细胞色素C活力=───────────×100%
化学还原吸收度