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药物分析之西药分析——维生素D测定法

来源:233网校 2006年8月17日
  本法系用高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定维生素D(包括维生素D<[2]>和D<[3]>,下同)及其制剂、维生素AD制剂或鱼肝油中所含维生素D及前维生素D经折算成维生素D的总量,以单位表示,每单位相当于维生素D0.025μg。
  测定应在半暗室中及避免氧化的情况下进行。
  无维生素A醇及其他杂质干扰的供试品可用第一法测定,否则应按第二法处理后测 定;如果按第二法处理后,前维生素D峰仍受杂质干扰,仅有维生素D峰可以分离时,则应按第三法测定。
  第一法
  对照品贮备溶液的制备
  根据各制剂中所含维生素D的成分,精密称取相应的维生素D<[2]>或D<[3]>对照品25mg,置100ml棕色量瓶中,加异辛烷80ml,避免加热,用超声处理助溶1分钟使完全溶解,加异辛烷至刻度,摇匀,充氮密塞,避光,0℃以下保存。
  测定维生素D<[2]>时,应另取维生素D<[3]>对照品25mg,同法制成维生素D<[3]>对照品贮备溶液,供系统适用性试验用。
  内标溶液的制备
  称取邻苯二甲酸二甲酯25mg,置25ml量瓶中,加正己烷至刻度,摇匀。
  色谱条件与系统适用性试验
  用硅胶为填充剂,正己烷-正戊醇(997∶3)为流动相,检测波长为254nm。量取维生素D<[3]>对照品贮备溶液5ml,置具塞玻璃容器中,通氮后密塞,置90℃水浴中加热1小时,取出迅速冷却,加正己烷5ml,摇匀,置1cm具塞石英吸收池中,在2支8W主波长分别为254和365nm的紫外光灯下,将石英吸收池斜放成45°,并距灯管5~6cm,照射5分钟,使溶液中含有前维生素D<[3]>、反式维生素D<[3]>、维生素D<[3]>和速甾醇D<[3]>;取此溶液注入液相色谱仪,测定维生素D<[3]>的峰值,先后进样5次,相对标准偏差应不大于2.0%;前维生素D<[3]>(与维生素D<[3]>的比保留时间约为0.5)与反式维生素D<[3] >(与维生素D<[3]>的比保留时间约为 0.6)以及维生素D<[3]>与速甾醇D<[3]>(与维生素D<[3]>的比保留时间约为1.1)的峰分离度均应大于1.0。
  校正因子测定
  精密量取对照品贮备溶液和内标溶液各5ml,置50ml量瓶中,加正己烷至刻度,摇匀;取一定量注入液相色谱仪,计算维生素D的校正因子f<[1]>。
  另精密量取对照品贮备溶液5ml置50ml量瓶中,加入2,6-二叔丁基对甲酚结晶1粒,通氮排除空气后,密塞,置90℃水浴中加热1.5小时,取出迅速冷却至室温,精密加内标溶液5ml,加正己烷至刻度,摇匀;取一定量注入液相色谱仪,计算前维生素D折算成维生素D的校正因子f<[2] >。
  f<[2]>=(A<[s]>·m<[r]>-f<[1]>m<[s]>A<[r1]>)/A<[r2]>·m<[s]>
  式中
  A<[s]>为内标的峰值;
  m<[r]>为加入对照品的量;
  f<[1]>为维生素D的校正因子;
  m<[s]>为加入内标物质的量;
  A<[r1]>为维生素D的峰值;
  A<[r2]>为前维生素D的峰值。
  含量测定
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