药物分析之西药分析——高效液相色谱法

　　(2) 主成份自身对照法
　　当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用主成分自身对照法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱峰面积满足准确测量要求。然后取供试品溶液，进样，记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并和对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。
　　(3) 内标法测定供试品中杂质的总量限度
　　采用不加校正因子的峰面积法。取供试品，按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图Ｉ；再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注样，记录色谱图Ⅱ。记录的时间除另有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保留时间的倍数，色谱图上内标峰高应为记录仪满标度的30％以上，否则应调整注样量或检测器灵敏度。
　　如果色谱图Ⅰ中没有与色谱图Ⅱ上内标峰保留时间相同的杂质峰，则色谱图Ⅱ中各杂质峰面积之和应小于内标物质峰面积（溶剂峰不计在内）。如果色谱图Ⅰ中有与色谱图Ⅱ上内标物质峰保留时间相同的杂质峰，应将色谱图Ⅱ上的内标物质峰面积减去色谱图Ⅰ中此杂质峰面积，即为内标物质峰的校正面积；色谱图Ⅱ中各杂质峰总面积加色谱图Ⅰ中此杂峰面积，即为各杂质峰的校正总面积，各杂质峰的校正总面积应小于内标物质峰的校正面积。
　　(4)内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量
　　按各品种项下的规定,精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：
　　　　　　　　　　A<[s]>／m<[s]>
　　校正因子（f）＝───────
　　　　　　　　　　A<[r]>／m<[r]>
　　式中
　　A<[s]>为内标物质的峰面积或峰高；
　　A<[r]>为对照品的峰面积或峰高；
　　m<[s]>为加入内标物质的量；
　　m<[r]>为加入对照品的量。
　　再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品（或其杂质）峰和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：
　　　　　　　　　　　　A<[x]>
　　含量(m<[x]>)＝f×───────
　　　　　　　　　　　　A<[s]>／m<[s]>
　　式中
　　A<[x]>为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；
　　m<[x]>为供试品（或其杂质）的量；
　　f、A<[s]>和m<[s]>的意义同上。
　　当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。
　　(5)外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量
　　按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：
　　　　　　　　　　　　　A<[x]>
　　含量(m<[x]>)＝m<[r]>×────
　　　　　　　　　　　　　A<[r]>
　　式中各符号意义同上
　　由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环进样为好。