药物分析：检验的基本程序与方法

2. 异常毒性试验异常毒性试验是用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物死亡与否为终点。中国药典规定的异常毒性试验，实际上是一个限度试验。在此剂量条件下，一般供试品不应使试验动物中毒致死；如果出现试验动物急性中毒而死亡，则反映该供试品中含有的急性毒性物质超过了正常水平，因此，本试验又称异常毒性检查法。在出现试验动物死亡时，除动物试验方法存在的差异或偶然差错外，主要决定于供试品在生产过程中是否带入可引发异常毒性反应的杂质。异常毒性试验的动物为小白鼠。试验操作方法有尾静脉注射法、皮下注射法、腹腔注射法及口服给药法等。
中国药典（1995年版）中规定了50多种药物需做异常毒性检查。例如，玻璃酸酶的异常毒性检查方法如下：
取体重17～22g的健康小白鼠5只，分别由皮下注射每lml中含玻璃酸酶10000单位的氯化钠注射液0.25时，48hr内不得发生皮下组织坏死或死亡，如有一只小白鼠发生组织坏死或死亡，应按上述方法复试，全部小白鼠在48h内不得有组织坏死或死亡现象。
3．过敏试验过敏试验是检查异性蛋白的试验。药物中若夹杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下降，甚至休克和死亡。因此，有可能存在异性蛋白的药物、应作过敏试验。例如，细胞色素C是蛋白制剂，在制备中可能掺入少量杂蛋白，为保证使用安全，中国药典规定细胞色素C溶液及细胞色素C注射液应做过敏试验。方法如下：
取本品适量，加灭菌注射用水稀释成每1ml中含细胞色素C7．5mg的溶液，作为致敏液与供试品溶液。另取体重为250～350g的健康豚鼠6只，连续3 次隔日腹腔注射致敏液0．5时，2周后，再自股（耳）静脉注射供试品溶液1时，注射后15min内，均不得出现过敏性反应。如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽三声等现象中的两种或两种以上者，或有抽搐、虚脱或死亡等现象之一者，应判为阳性。
4．降压物质检查法降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。在用动物脏器或组织为原料制备生化药物的过程中，正常组织内存在的组胺及部分氨基酸脱羧形成的组胺、酪胺等胶类物质，均为这类杂质的来源。以组胺为代表的胺类，具有剌激支气管、肠管平滑肌，扩张毛细血管及人类小动脉的作用，注入体内能导致人、狗、猫或猴的血压下降。临床上注射染有此类降压物质的注射液后，将引起面部潮红、脉搏加速和血压下降等不良反应。因此，除了从生产工艺上采取有效措施以减少可能的污染外，对有关药品中的降压物质进行检查并控制其限度是十分必要的。中国药典采用猫（或狗）血压法检查药物如硫酸链霉素、硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素等十几种药物中所含的降压物质。
5．无菌检查法无菌检查法是检查药品及敷料是否染有活菌的一种方法，是药典中较重要的检查项目之一。由于许多生化药物是在无菌条件下制备的，且不能高温灭菌。因此，无菌检查就更有必要。中国药典中几乎所有的注射用药如注射用尿激酶等，均做无菌检查。由于取样和试验方法的局限性，对于保证药品的无菌要求，首先应严格执行 GMP管理制度，使药品真正达到无菌，而无菌检查只是控制这些制品染菌状况的一种检测手段。
（1）无菌检查的基本步骤：①培养基的制备，为细菌生长、繁殖提供所必需的营养物质一碳源、氮源、维生素、矿物质等。②选择对照用菌液，供对照试验用。③具体检查，如接种、培养等操作。④结果判断，得出阴性或阳性的结论。
（2）注意事项：①无菌检查的全部过程应严格遵守无菌操作法，包括对操作环境、试验材料及用具酶灭菌等，防止微生物污染。②应避免在有抑菌条件下操作。③从事无菌操作人员应具备微生物学的基础知识及一定工作经验，否则要经过无菌技能的培训，方能从事此工作。
四、含量（效价）测定
生化药物的含量表示方法通常有两种：一种用百分含量表示，适用于结构明确的小分子药物或经水解后变成小分子的药物。另一种用生物效价或酶活力单位表示，适用于酶类、蛋白质类等药物。常用的定量分析法将在第三节中介绍。