药物分析辅导：银杏叶片含量测定方法

     银杏叶片为银杏叶提取物经加工制成的片。
    2005版《中国药典》含量测定项下：
    总黄酮醇苷
    色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计应不低于2500。
     供试品溶液的制备：取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮苷19.2mg的粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置 100ml锥形瓶中，加甲醇10ml，25%盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
    萜类内酯
    色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丁醇-四氢呋喃-水（1：15：84）为流动相；用蒸发光散射检测器。理论板数按白果内酯峰计应不低于2500。
     供试品溶液的制备：取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于萜类内酯19.2mg的粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，回收甲醇，残渣加水10ml，置水浴中温热使溶散，加2%盐酸2滴，用醋酸乙酯振摇提取4次（15ml，10ml，10ml，10ml），合并提取液，用 5%醋酸钠溶液20ml洗涤，分取醋酸钠液，用醋酸乙酯10ml洗涤。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗涤2次，每次20ml，合并水液，用醋酸乙酯 10ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收至干，残渣哟功能甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
    测定总黄酮苷含量时常用的流动相系统一般加入磷酸调节pH值，如：李芳等用HPLC法测定银杏叶片剂中总黄酮苷的含量，采用Waters 高效液相色谱仪。色谱柱为 Spherisorb C18φ（100mm×4.6mm，5μm）,检测波长：370mm,流动相：甲醇-0.3%H3PO4 溶液(40：60),流速：1ml/min,柱温：40℃。样品用甲醇超声处理。结果槲皮素在0.28～2.52μg之间线性关系良好,相关性显著，平均加样回收率为101.1%，RSD=2.69%。
    测定黄酮含量时有采用HPLC法，也有紫外分光光度法，如：陶巧凤等采用HPLC测定了11个制药公司的15批银杏叶片的黄酮（槲皮素 、山奈酚 、异鼠李素）的含量，采用Waters 高效液相色谱仪。色谱柱为Nova-pak C18(4μ) 200×4mm(大连化物所)，流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(1：1)，检测波长360nm，柱温为室温。样品用甲醇超声处理后，用4%硫酸溶液水解。丁青龙等用紫外分光光度法，以芦丁为对照品测定银杏叶片剂中总黄酮的含量，测定波长为500nm，样品用70%乙醇回流提取。
     测定内酯含量时，如：张雪琴等用HPLC法测定银杏叶片中银杏内酯的含量，采用HP1100高效液相色谱仪，色谱柱为Hypersil ODS2( 250mm×410mm, 5μm )，流动相：23%CH3OH水溶液，体积流量1.0mL/min，柱温25℃。理论塔板数以银杏内酯B计算不低于5000。样品用5%双氧水回流提取，滤过, 滤液用醋酸乙酯萃取多次, 萃取液用1%NaHCO3水溶液萃取多次后, 再用1%Na2SO3水溶液萃取, 醋酸乙酯层继续用蒸馏水和5%NaCl溶液萃取，醋酸乙酯萃取液回收溶剂，用50%CH3OH定容。