☆ ☆☆考点3：乳糖和蔗糖的分析
1．性质
乳糖和蔗糖都属于双糖，呈无色或白色结晶性粉末。乳糖由一个D-半乳糖和一个D-葡萄糖经1,4缩合而成，保留一个半缩醛羟基，具还原性；蔗糖由一个D-葡萄糖和一个D-果糖经1,2缩合而成，无半缩醛羟基，因而无还原性。两者分子中都含有不对称碳原子，有旋光性。
2．比旋度的测定
（1）乳糖比旋度的测定。取本品，在80℃干燥2小时后，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含本品0.10g与氨试液0.02ml的溶液，依法测定，比旋度为+52.0°～+52.6°。
（2）蔗糖比旋度的测定。取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1g的溶液，依法测定，比旋度不得少于+66°。
3．鉴别
（1）乳糖的鉴别
①与硫酸铜试液的反应。是利用本品的还原性进行鉴别。取本品1.0g，加氢氧化钠试液5ml，微热，溶液初显黄色，后变为棕红色，再加硫酸铜试液数滴，即析出氧化亚铜的红色沉淀。
②红外光谱法。本品的红外光谱应与对照的图谱一致。
（2）蔗糖的鉴别
①与碱性酒石酸铜试液的反应。蔗糖在酸性条件下，加热水解得葡萄糖，具有还原性，可使得碱性酒石酸铜中铜离子还原为红色的氧化亚铜沉淀。取本品适量，加0.05mol/L硫酸溶液，煮沸后，用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和，再加碱性酒石酸铜试液，加热即生成氧化亚铜的红色沉淀。
②炭化反应。取本品，用直火加热，先熔融膨胀，后燃烧并发生焦糖臭，遗留多量的炭。
4．特殊杂质检查
（1）乳糖中蛋白质的检查。乳糖主要由动物乳汁中提取制得，如处理不当，蛋白质可包在糖块中而不易除去。因此，利用蛋白质类杂质遇硝酸汞试液产生的白色絮状沉淀，进行特殊杂质“蛋白质”的检查。
检查方法：取本品5.0g，加热水25ml溶解后，放冷，加硝酸汞试液0.5ml，5分钟内不得生成絮状沉淀。
（2）蔗糖中还原糖的检查。蔗糖从甘蔗或甜菜汁液中制得，所以常带入一些还原性糖（如葡萄糖或麦芽糖），因此，利用还原性糖可使铜离子还原的性质，使本品与定量过量的碱性枸橼酸铜反应，再加过量的碘化钾，Cu2+氧化I-成I2，I2再用硫代硫酸钠滴定，同时规定还原糖不能超过的限量。
检查方法：取本品5.0g，置250ml锥形瓶中，加水25ml溶解后，精密加入碱性枸橼酸铜试液25ml与玻璃珠数粒，加热回流使在3分钟内沸腾，从全沸时起，连续沸腾5分钟，迅速冷却至室温（此时应注意勿使瓶中氧化亚铜与空气接触），立即加25%碘化钾溶液15ml，摇匀，随振摇随缓缓加入硫酸溶液（1→5）25ml，俟二氧化碳停止放出后，立即用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，同时做一空白试验；二者消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）的差数不得过2.0ml，限度为0.10%。
（3）蔗糖中的钙盐的检查。在蔗糖的制备过程中也会带入钙离子，需进行检查。利用钙离子能与草酸根离子生成沉淀的性质，取本品1.0g，加水25ml使溶解，加氨试液1ml与草酸铵试液5ml，摇匀，放置1小时，与标准钙溶液（精密称取碳酸钙0.125g，置500ml量瓶中，加水5ml与盐酸0.5ml使溶解，加水至刻度，摇匀。每1ml相当于0.10mg的Ca）5.0ml制成的对照液比较，不得更浓，限度为0.05%。
☆ ☆☆☆考点4：洋地黄毒苷和地高辛的分析
1．结构及性质
洋地黄毒苷和地高辛是甾体强心苷类药物，其苷元是甾体的衍生物，C17上连有不饱和的内酯键，C3上接有3个洋地黄毒糖。
两种甾体强心苷类药物之间的差别仅在于地高辛苷元的C12位较洋地黄毒苷苷元多了一个羟基。
2．鉴别
（1）Keller-Kiliani反应（α-去氧糖反应）。如洋地黄毒糖为α-去氧糖类，具有活泼性较大的特性。洋地黄毒苷和地高辛均以Keller-Kiliani反应作为鉴别，样品加三氯化铁冰醋酸溶液，显靛蓝色。
鉴别方法：将甾体强心苷溶于含有微量FeCl3（1滴9%FeCl3）的冰醋酸1～2ml中，沿管壁缓缓加入浓硫酸1.2ml，使成两液层。两液层交界面处显棕色；醋酸层显蓝色或蓝绿色，放置1小时后显靛蓝色。
（2）Kedde反应。为苷元的不饱和内酯侧链反应。甾体强心苷元的C17上常有α-β或β-γ的不饱和内酯，即丁烯内酯，在碱性水溶液中易与芳香硝基化合物形成有色的络合阴离子，可供鉴别。
鉴别方法：取供试品约2mg，置试管中，加乙醇2ml溶解后，加二硝基苯甲酸试液与乙醇制氢氧化钾试液各10滴，摇匀后，溶液即显红紫色。
（3）纸色谱法（用于地高辛鉴别）。地高辛供试品和对照品溶液的制备：各取适量，并加入甲醇-氯仿（1：1）制成每1ml中含2.5mg的溶液，备用。取新华快速1号滤纸，事先用新制的甲酰胺-丙酮（3：7）浸渍5分钟以上，取出，用洁净滤纸适当压干。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一色谱滤纸上，以新制的甲酰胺的饱和氯仿溶液（取氯仿25份，加甲酰胺1份，充分振摇，放置，分取氯仿层，用脱脂棉滤过）为展开剂，照上行法展开后，在100℃烘干，置紫外光灯（365nm）下检视，不得有斑点；喷以新制的三氯醋酸的氯仿溶液，再在100℃烘干，放冷，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品所显主斑点的荧光和位置应与对照品的主斑点相同。
甾体强心苷与上述新制的三氯醋酸的氯仿溶液加热，即得蓝色斑点。
（4）红外光谱法（用于地高辛鉴别）。要求本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
3．特殊杂质检查
（1）洋地黄毒苷中洋地黄皂苷的检查。洋地黄皂苷由分离过程中引入。利用其可和胆甾醇结合成醇中不溶物进行检查。取本品10mg，加乙醇2ml溶解后，加胆甾醇的乙醇溶液（1→200）2ml，缓缓振摇混合，在10分钟内，不得发生沉淀。
（2）地高辛中洋地黄毒苷的检查。本检查采用纸色谱法。取本品与洋地黄毒苷对照品，分别加甲醇-氯仿（1：1）制成每1ml中含供试品5.0mg的溶液与每1ml中含对照品0.30mg的溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一色谱滤纸（规格与处理方法同色谱法鉴别）上，照上行法，以新制的甲酰胺的饱和二甲苯-丁酮溶液为展开剂，展开后在120℃烘干，放冷，喷以上述新制的三氯醋酸的氯仿溶液，再在100℃烘干，放冷，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点，其荧光强度与对照品溶液的主斑点比较，不得更强（即不大于6%）。
4．含量测定
（1）洋地黄毒苷的含量测定。先用柱色谱分离洋地黄毒苷和杂质，再用比色法进行测定。
①供试品制备。精密量取供试品约10mg置50ml容量瓶中，加氯仿10ml溶解后，加苯至刻度，摇匀，精密量取10ml，加入色谱柱中，以苯-氯仿（3：1）洗脱，流速为每分钟不超过4ml，收集洗脱液于250ml容量瓶中，至刻度时停止洗脱，另加氯仿适量至刻度，摇匀，精密量取25ml。
②对照品制备。精密量取对照品适量，加苯-氯仿（4：1）溶解，并定量稀释制成40μg/ml的溶液，精密量取5ml。
供试品、对照品分别置锥形瓶中，在水浴上蒸干，残渣中各加乙醇0.5ml，蒸干，放冷至室温，精密加70%乙醇5ml，密塞，在22～25℃放置15分钟，并时时振摇，再精密加入新制的碱性三硝基苯酚试液3ml，摇匀，在22～25℃避光放置30分钟，照分光光度法，立即在485nm的波长处分别测定吸收度，计算即得。
地高辛原料药采用碱性三硝基苯酚显色后，于485nm处比色测定。
（2）洋地黄毒苷片的含量测定。采用荧光分析法测定。
①供试液制备：取本品20片研细，精密称取适量(约相当于0.4mg药品)置100ml容量瓶中，用甲醇-水(1：1)约60ml，振摇1h，使其溶解并稀释至刻度，摇匀后过滤，取续滤液待测。
②对照液制备：精密称取对照品适量，用甲醇-水(1：1)溶解并定量稀释制成浓度为4μg/ml的对照品溶液。
各精密量取1ml，分别置10ml容量瓶，依次加入0.1%抗坏血酸的甲醇溶液3ml、0.009mol/L过氧化氢溶液0.2ml，每加入一种试剂后立即摇匀，然后用盐酸稀释至刻度，摇匀，准确静置0.5h，照荧光分析法，在激发波长400nm，发射波长565nm处测定荧光读数，计算即得。
（3）地高辛的含量测定：利用三硝基苯酚试液的显色反应，采用比色法测定。
①对照液制备：取对照品10mg精密称定，置50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。
②供试液制备：取样品10mg精密称定，照对照品项下的方法配制。
各精密量取10ml，分别精密加入新制的碱性三硝基苯酚试液6ml，摇匀，在20～25℃暗处放置30min，立即置1cm吸收池中，于485nm处分别测定吸收度。
注意：①碱性三硝基苯酚试液是显色剂，应新鲜配制，并于2日内使用；②显色反应须严格控制温度与时间，显色在30～45min内较稳定。
（4）地高辛片的含量测定：采用荧光法测定。
①原理：利用洋地黄毒苷+维生素C+H2O2+HCl→产生荧光。
②对照液制备：精密称取对照品适量，加80%乙醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为2.50μg/ml的溶液即得。
③供试液制备：取本品20片研细，精密称取适量(约相当于1.25mg药品)，置100ml容量瓶，用80%乙醇适量，振摇1小时使药物溶解并用其稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液2ml，置10ml容量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
各取1ml，分别置10ml容量瓶中，依次各精密加入0.1%抗坏血酸的甲醇溶液3ml、0.009mol/L过氧化氢溶液0.2ml，每加入一种试剂后立即摇匀，再用盐酸稀释至刻度，摇匀，于30℃避光静置2h，立即照荧光分析法，在激发波长360nm，发射波长485nm处测定荧光读数，计算即得。
