☆ ☆☆☆考点3：维生素C及其制剂的分析
1．结构及性质
维生素C在化学结构上和糖类十分相似。它有四种光学异构体，其中以L-构型右旋体的生物活性最强。
维生素C分子结构中具有二烯醇结构，因此维生素C具有弱酸性，pK1=4.17，pK2=11.57，维生素C还具有较强的还原性，可以被多种氧化剂氧化。
维生素C在水中易溶，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。
2．鉴别
（1）与硝酸银试液的反应
鉴别方法：取供试品0.2g，加水10ml溶解。取溶液5ml，加硝酸银试液0.5ml，即生成银的黑色沉淀。
维生素C分子中有二烯醇基，具强还原性，可被硝酸银氧化为去氢维生素C，同时产生黑色银沉淀。
（2）与二氯靛酚钠试液的反应
鉴别方法：取供试品0.2g，加水10ml溶解，取溶液5ml，加二氯靛酚钠试液1～2滴，试液的颜色即消失。2,6-二氯靛酚为一染料，其氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝色。与维生素C作用后生成还原型的无色酚亚胺，从而使颜色消失。
（3）红外光谱法。维生素分子中含有羟基、酯基，它们在红外光谱中产生特征吸收峰，峰的归属如下表：
《中国药典》规定，本品的红外吸收光谱应与对照的图谱一致。
3．铁和铜的检查
采用原子吸收分光光度法检查。
检查方法：取样品5.0g两份，分别置25ml量瓶中，一份加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液（B），另一份中加入标准铁溶液（0.01mol/ml）1.0ml，加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，作为对照溶液（A），用原子吸收分光光度法，在248.3nm的波长处分别测定供试品溶液的读数（b）和对照品溶液的读数（a），b应小于（a-b）。
248.3nm是铁的分析线波长。采用标准加入法检查，由于对照品溶液中加入了等量的供试品，所以对照品的吸收为a-b，b＜（a-b）即为合格，限量为百万分之二。
铜的检查方法与铁相似，称取供试品2.0g两份，于一份中加入标准铜溶液（0.01mgCu/ml）1.0ml，加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，在324.8nm处分别测定供试品溶液和对照品溶液的读数b和a，b＜（a-b）即为合格，限量为百万分之五。
4．含量测定
（1）维生素C的含量测定。维生素C具有还原性，采用碘量法测定。
测定方法：取供试品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸：10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪色。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。
滴定前加入稀醋酸可使滴定时维生素C受空气中氧的氧化作用减慢，但供试品溶于稀酸后，仍需立即滴定。使用新沸过的冷水作为溶剂，是为了减少水中溶解氧对测定的影响。
供试品中维生素C的含量，是由消耗的碘滴定液来计算的。《中国药典》附录中碘滴定液的摩尔浓度是以碘原子而非碘分子为物质的量单位计算的。由以上反应可知，1mol的I相当于1/2mol的维生素C，维生素C的分子量为176.13，因此每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。含量测定结果的计算公式如下。
式中，V--消耗碘滴定液的体积，ml；T--滴定度；C--碘滴定液的浓度，mol/L；W--为样品的称样量，g。
（2）维生素C注射液的含量测定
测定方法：精密量取供试品适量（约相当于维生素C 0.2g），加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪色。每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6。
测定时所加2ml丙酮是用来消除注射液内含有的抗氧剂亚硫酸氢钠对测定的影响。亚硫酸氢钠可以和丙酮发生加成反应而被消耗除去。
☆ ☆☆☆考点4：维生素E的分析
1．结构及性质
维生素E是消旋-α-生育酚醋酸酯，其结构如下：
维生素E具有苯并二氢吡喃的结构，苯环上有1个乙酰化的酚羟基，水解后成为生育酚，生育酚具有较强的还原性，可以被多种氧化剂氧化。
维生素E为微黄色或黄色透明的黏稠液体，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中，不溶于水。
2．鉴别
（1）与硝酸的反应
鉴别方法：取供试品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热约15分钟，溶液显橙红色。维生素E在酸性条件下加热先水解为生育酚，进一步被硝酸氧化成生育红，显橙红色。
（2）水解后的氧化反应
鉴别方法：取供试品约10mg，加醇制氢氧化钾试液2ml，煮沸5分钟，放冷，加水4ml与乙醚10ml，振摇，静置使分层，取乙醚液2ml，加2,2'-联吡啶的乙醇溶液（0.5→100）数滴和三氯化铁的乙醇溶液（0.2→100）数滴，应显血红色。
维生素E在碱性溶液中加热水解生成游离生育酚，该产物被三氯化铁氧化为对一生育醌，同时生成亚铁离子，后者与联吡啶生成血红色配离子。
3．生育酚的检查
维生素E的酯基易断裂，生成生育酚。利用其还原性，用硫酸铈滴定液滴定，二苯胺为指示剂。《中国药典》控制维生素E中生育酚的限量为2.15%。
检查方法：取供试品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈滴定液不得超过1.0ml。
4．含量测定
《中国药典》、《美国药典》、《英国药典》等均采用气相色谱法进行测定。
色谱条件与系统适用性试验载气为氮气；以硅酮（OV-17）为固定相，涂布浓度为2%；柱温为265℃；检测器为氢火焰离子化检测器。理论塔板数按维生素E峰计算应不低于500；维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。
校正因子测定取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1.0mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取1～3μl注入气相色谱仪，计算校正因子。
测定方法：取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取1～3μl注入气相色谱仪，测定，计算，即得。
结果计算：
式中，As--对照品溶液中内标物质的峰面积或峰高；AR--对照品的峰面积或峰高；ms--加入内标物质的量，mg；mR--对照品的量，mg。根据校正因子按下式计算含量。
式中，mX--供试品中测定组分的量，mg；AX--供试品溶液中维生素E的峰面积或峰高；As--供试品溶液中内标物质的峰面积或峰高；ms--加入内标物质的量，mg。
