☆ 考点3：巴比妥类药物特殊杂质的检查
苯巴比妥的合成工艺如下：
《中国药典》在苯巴比妥质量标准中设立了“酸度”、“乙醇溶液的澄清度”和“中性或碱性物质”检查项，以限制相关杂质的含量。
1．酸度
当中间体Ⅱ的乙基化反应进行不完全时，会与尿素缩合生成苯丙二酰脲。该分子酸性较苯巴比妥强，能使甲基橙指示剂显红色。《中国药典》规定，在一定量苯巴比妥供试品水溶液中加甲基橙指示剂，不得显红色，以此来控制供试品中酸性物质的量。
2．乙醇溶液的澄清度
苯巴比妥酸杂质在乙醇溶液中溶解度小，而主成分苯巴比妥溶解度大，据此可通过检查乙醇溶液的澄清度来检查苯巴比妥酸杂质。
方法：取供试品1.0g，加乙醇5ml，加热回流3分钟，溶液应澄清。
3．中性或碱性物质
这类杂质主要是中间体Ⅰ的副产物2-苯基丁酰胺、2-苯基丁酰脲或分解产物。这些物质为中性或碱性物质，不溶于氢氧化钠试液而溶于醚，利用这一特性，将它们从样品中分离提取出来，再称重，以确定是否超过规定的限量。
方法：取供试品1.0g，置分液漏斗中，加氢氧化钠试液10ml溶解后，加水5ml与乙醚25ml，振摇1分钟，分取醚层，用水振摇洗涤3次，每次5ml，取醚液经干燥滤纸滤过，滤液置105℃恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥1小时，遗留的残渣不得过3mg。
司可巴比妥钠的质量标准中也设有“中性或碱性物质”检查项，方法和原理完全同于苯巴比妥。
☆ ☆☆考点4：巴比妥类药物的含量测定
根据本类药物不同的结构特点，可以采用银量法、溴量法及紫外分光光度法测定含量。
1．银量法
《中国药典》采用银量法测定苯巴比妥及其制剂的含量。
（1）测定方法。取供试品约0.2g，精密称定，加甲醇40ml使溶解，再加新制的3%无水碳酸钠溶液，用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定，电位法指示终点。每1ml硝酸银滴定液相当于23.22mg的C12H12N2O3。
（2）优点：操作方便，适合巴比妥类药物分析。
（3）缺点：近终点反应较慢，不易观察，且温度影响较大，温度升高，二银盐溶解度降低，结果偏低；反之，结果偏高。用甲醇作溶剂，电位法指示终点（银-玻璃电极系统），可消除这一缺陷，1985、1990、1995及2000年版的《中国药典》均采用此法。
以上滴定中，1mol的AgNO3相当于1mol的苯巴比妥。
2．溴量法
司可巴比妥钠分子结构中含有烯丙基，其双键可与溴定量地发生加成反应，《中国药典》采用溴量法对司可巴比妥钠原料药及其胶囊进行含量测定。
测定方法：取供试品约0.1g，精密称定，置于250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1ml/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1分钟，在暗处放置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.1mol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠（C12H17N2NaO3）。
1mol的Br相当于1/2mol的司可巴比妥钠，司可巴比妥钠的分子量为260.27，所以1ml溴滴定液（0.1mol/L）相当于13.01mg的药物。
式中，V0和V--空白试验和样品测定时消耗硫代硫酸钠滴定液的体积，ml；C--硫代硫酸钠滴定液的浓度，mol/L；W--供试品的取样量，g。
3．紫外分光光度法
硫代巴比妥类药物在酸性或碱性溶液中均有紫外吸收，强碱性溶液中，在304nm处有吸收峰。《中国药典》以硫喷妥为对照品，采用紫外分光光度法测定注射用硫喷妥钠的含量。
测定方法：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，量取此溶液用0.4%氢氧化钠液定量稀释制成每1ml中约含5μg的溶液；另取硫喷妥对照品，精密称定，加0.4%氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每lml中约含5μg的溶液。在304nm的波长处分别测定吸收度，按对照品比较法计算含量。每1mg的硫喷妥相当于1.091mg的硫喷妥钠（C11H17N2NaO2S）。
结果计算：
取样量中硫喷妥钠的量（mg）=50×1.091×（Ax/AR）×CR
式中，CR--硫喷妥对照品溶液的浓度，μg/ml；Ax--供试品溶液的吸收度；AR--对照品溶液的吸收度；1.091--硫喷妥钠与硫喷妥的分子量的比值；50由来于：500×100×10-3，其中500为供试品溶液体积（ml），100为测定溶液的稀释倍数，10-3是将微克换算成毫克。
