第六节 电泳法
电泳法:在电场的作用下,依据各组分之间淌度的不同实现分离的方法。分离程度取决于淌度之差。
一、基本原理: 电泳迁移速度为: :电泳淌度 :电场强度
影响电泳分离的条件:1、缓冲液的PH值和离子强度 2、电场强度 3、样品浓度
二、电泳仪:
3、 各类电泳法:
(1)纸电泳法 (2)醋酸纤维素电泳法:主要用于测定蛋白质相对百分含量
(3)琼脂糖凝胶电泳法: (4)聚丙烯酰胺凝胶电泳法
(5)SDS聚丙烯胺凝胶电泳法:测定蛋白质的分子量
四、毛细管电泳法简介:以弹性石英毛细管为分离通道,高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离的分析方法。
第八章 其他方法
第一节 PH值测定法
PH计:包括PH测量电池和PH指示器。
1、 PH计工作原理:两次测量法
2、 PH值测定方法:
1、PH-mV选择:
2、温度补偿:25℃时改变一个PH单位,电动势改变59mV,15℃时改变57mV.
3、仪器校正(定位)和核对:用标准PH缓冲液校准,用定位调节钮使PH读数与标准液一致。
4、测定:中国药典2000规定五种标准液 25℃时为:1.68 ,4.00,6.86,7.41,9.18 .
3、 注意事项:
1、测定前选相差3个单位的标准缓冲液,使供试品处于二者之间。
2、取较接近的一种进行校正,使仪器与表列数值一致。
3、用第二种核对时,误差应不大于 0.02 PH单位 .重复 否则检查仪器或更换电极。
4、电极用水充分洗涤吸干。
5、弱缓冲液的测定先用邻苯二甲酸氢钾校正仪器,再用硼砂,直至1分内不超过 0.05单位。
第二节 氧瓶燃烧法
1、 基本原理:将有机物放入充满氧气的燃烧瓶中进行燃烧。
2、 仪器装置和设备
磨口硬质玻璃锥形瓶 固体样品:无灰滤纸 液体样品:纸袋
吸收液:多数水或水——氢氧化钠的混合液,少数水——氢氧化钠——浓过氧化氢混合液、或硝酸溶液
4、 燃烧操作法
5、 注意事项 产生烟雾:碘:紫色 溴:红棕色 氟、氯:白色 测定氟化氢用石英制燃烧瓶
6、 应用:有机卤素、硫、磷及硒等杂质的检查。
第三节 脂肪与脂肪油的测定法
相对密度系指在相同的温度、压力条件下,某种物质的密度与水的密度之比,温度为20 C .
液体相对密度用比重瓶进行测定,易挥发液体的相对密度用韦氏比重秤测定 .
第四节 X-射线衍射法
粉未衍射是结晶物质鉴别和纯度检查最常用技术,单晶衍射主要用于分子量和晶体结构的测定。
第五节 热分析法
1、 各类热分析法:
1、热重法:测量物质质量与温度关系的一种技术。
2、差热分析法:测量待测物质和参比物的温度差。
3、差示扫描量热法:测量输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系的一种技术 .