执业药师《中药化学》辅导：色谱法的应用

　　1、分配柱色谱：载体主要有硅胶、硅藻土及纤维素粉等。
　　分离水溶性或极性较大的成分如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物时，固定相多采用强极性溶剂，如水、缓冲溶液 等，流动相则用氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱极性有机溶剂，称之为正相色谱：
　　分离脂溶性化合物，如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等时，固定相可用石蜡油，流动相 用水或甲醇等强极性溶剂，称为反相分配色谱。
　　2、吸附色谱法应用
　　（1）硅胶、氧化铝吸附柱色谱过程中，吸附剂的用量一般为样品量的30-60倍。样品极性较小、难以分离者，吸附剂用量可适当提高至样品量的100-200倍。
　　（2）硅胶、氧化铝吸附柱色谱，应尽可能选用极性小的溶剂装柱和溶解样品，以利于样品在吸附剂柱上形成狭窄的原始谱带。
　　（3）洗脱所用溶剂的极性宜逐步增加。
　　（4）为避免发生化学吸附，酸性物质宜用硅胶，碱性物质则宜用氧化铝进行分离。
　　3、聚酰胺吸附色谱法
　　聚酰胺（polyamide）吸附属于氢键吸附，特别适合分离酚类、醌类、黄酮类化合物。
　　（1）聚酰胺的性质及吸附原理
　　酰胺羰基与酚类、黄酮类化合物的酚羟基，或酰胺键上的游离氨基与醌类、脂肪羧酸上的羰基形成氢键缔合而产生吸附。创吸附强弱则取决于各种化合物与之形成氢键缔合的能力。
　　① 形成氢键的基团数目越多，吸附能力越强。
　　② 成键位置对吸附力也有影响。易形成分于内氢键者，其在聚酰胺上的吸附相对减弱。
　　③ 分子中芳香化程度高者，则吸附性增强；反之，则减弱。
　　一般情况下，各种溶剂在聚酸胺柱上的洗脱能力由弱至强，可大致排列成下列顺序；水→甲醇→丙酮→氢氧化钠水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液
　　（2）聚酰胺色谱的应用
　　聚酰胺对一般酚类、黄酮类化合物的吸附是可逆的（鞣质例外），特别适用于该类化合物的制备分离，可用于植物粗提物的脱鞣质。此外，对生物碱、萜类、甾体、糖类、氨基酸等极性与非极性化合物也有着广泛的用途。
　　4、大孔吸附树脂
　　（1）大孔吸附树脂的吸附原理：大孔吸附树脂是吸附性和分子筛性原理相结合的分子材料。吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果，分子筛性是由于其本身多孔性结构所决定的。
　　（2）影响吸附的因素：大孔吸附树脂本身的性质、溶剂的性质和化合物的性质是影响吸附的3个重要因素。
　　（3）大孔吸附树脂的应用：苷与糖类的分离，生物碱的精制，多糖、黄酮、三萜类化合物的分离。
　　（4）洗脱液的选择：洗脱液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。