测定糖与苷元之间的苷键以及糖与糖之间的苷键的方法有三种 ┤ Klyne公式法
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└ NMR谱法
·酶水解 利用酶水解的专属性:麦芽糖酶水解α-苷键;苦杏仁苷酶水解β-苷键。
·Klyne经验公式计算 单糖端基碳的构型不同,对糖分子的旋光贡献也不同。将苷和苷元的分子旋光差与组成该苷的糖的一对甲苷(即α-和β-型苷)的分子比旋度进行比较,在数值上接近的一个便是与之有相同的苷键构型。如下:
△[M]D=[M]D苷─[M]D苷元
[常见糖的甲苷的分子比旋表]
·利用NMR谱法
1. 1N-NMR法
如果C2上H为E键,则无法用NMR法确定构型,如鼠李糖苷、甘露糖苷。
2. 13C-NMR谱
利用碳谱的化学位移和偶合常数推测苷键的构型。
在糖与苷元连接后,糖中端基碳原子的化学位移明显增加,而其他碳原子的化学位移变动不大。利用某些α-和β-构型的甲苷中,端基碳原子的化学位移相差较大,判断苷键的构型。[常见糖的α-和β- 甲基吡喃糖苷的化学位移]
此外,还可利用碳谱中的偶合常数J确定苷键的构型。
[几种甲苷的α和β构型的JC1-H1值(Hz)]