【性状鉴别】
团蟾酥
呈扁圆形团块或饼状，直径3cm～10cm，厚约5mm，茶棕色、紫黑色或紫红色，表面平滑。质坚硬，不易折断，断面棕褐色，角质状，微有光泽。气微腥，味麻辣，粉末嗅之作嚏。遇水即泛出白色乳状液。
片蟾酥
呈不规则片状，厚约2mm，一面较粗糙，另面较光滑。质脆，易折断。药材断面沾水，即呈乳白色隆起；粉末少许，于锡箔纸上，加热即熔成油状。均以色红棕、断面角质状、半透明、有光泽者为佳。
【显微鉴别】
粉末：淡棕色。
① 甘油水装片观察，呈半透明或淡黄不规则形碎块，并附有砂粒状固体。
② 浓硫酸装片观察，显橙黄色或橙红色，碎块四周逐渐缩小而呈考试，大网站收集透明的类圆形小块，表面显龟裂状纹理，放置稍久渐溶解消失。
③ 水装片加碘试液观察，不应含有淀粉粒。
【成分】
① 强心甾体化合物：为结构类似强心苷元而有毒性的蟾毒配基类（bufogenins）化合物，已知有10余种，大多为干燥加工过程中的分解产物，如华蟾毒配基约5％，脂蟾毒配基约3.4％，蟾毒灵约1.8％，羟基华蟾毒基约1.6％，蟾毒配基（bufotalin）约1.5％，远华蟾毒基（telocinobufagin）约1.4％及海蟾蜍精（marinobufagin）等；另含洋地黄毒苷元（digitoxigenin）、沙门苷元（sarmentogenin）等。
上述蟾毒配基类常在C3与辛二酰精氨酸（suberoylarginine）、庚二酰精氨酸（pimeloylarginine）、丁二酰精氨酸（succinoylarginine）、辛二酸、硫酸等结合成的酯类，统称为蟾毒类（bufotoxins），多存在于加工前的蟾酥分泌物中。
蟾酥中蟾毒配基和蟾毒的种类及含量，可因原动物、产地、采制时间和方法不同而有差异。
② 吲哚类生物碱：主要有蟾酥碱（bufotenine）、蟾酥甲碱（buforenidine）、去氢蟾酥碱（dehydrobufotenine）、蟾酥硫碱（bufothionie）及5-羟色胺（serotonin）等。
此外，含有甾醇类、肾上腺素及多种氨基酸。据近年报道，从蟾酥中还分出吗啡（morphine）。《中华人民共和国药典》1995年版规定：总灰分不得过5.0％；酸不溶性灰分不得过2.0％。
【理化鉴别】
① 取粉末约0.1g，加甲醇5ml，浸泡1小时，滤过，滤液加对二甲氨基苯甲醛固体少许，再加硫酸数滴，则显蓝紫色。（检查吲哚类化合物）
② 取粉末0.1g，加氯仿5ml，浸泡1小时，滤过，将滤液蒸干，残渣加醋酐少许使溶解，滴加硫酸，初显蓝紫色渐变蓝绿色。（检查甾醇）
③ 取1％蟾酥的氯仿提取液，蒸干后用甲醇溶解，测定其紫外吸收光谱，在波长300nm附近有最大吸收（检查脂蟾毒配基）。
④ 取细粉1g，加氯仿20ml回流1小时，滤过，滤液蒸干，加氯仿1ml使溶解，供试；另取脂蟾毒配基，以氯仿溶解成每1ml含2mg的溶液，作为对照。分别点样于同一硅胶GF254薄层板上，用苯-丙酮（7：3）上行展开，在紫外光灯（254nm）下检视，供试品在相应位置上与对照品显相同的暗红色斑点。
【含量测定】
取样品约0.5g，于80℃干燥2小时，研成细粉，精密称定，加海砂5g，混匀，置索氏提取器中，加氯仿适量，提取4小时，回收氯仿，残留物加乙醇适量使溶解，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量乙醇分数次洗涤容器，洗涤液并入量瓶中加乙醇稀释刻度，摇匀，精密量取1ml置25ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，以分光光度法在299nm波长处测定吸收度，按脂蟾毒配基C24H32O4的吸收系统（）为154计算，即得。《中华人民共和国药典》（1995年版）规定：本品含蟾毒内酯按脂蟾毒配基（C24H32O4）计，不得少于15.0％。
