本法系通过比较降钙素标准品(S)与供试品(T)对大白鼠血钙降低的程度,以测定供试品效价的方法。
溶剂的配制称取牛血清白蛋白0.2g,加水20ml,混匀,置56℃水浴中保温1小时,取出放至室温,于-10~-20℃温度下冻存。实验前取出,于36℃±0.5℃水浴中将其融化。加至含有2g醋酸钠的水溶液中,加入浓盐酸约3.5ml,再加水至总量近200ml,用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至3.5~4.5,最后加水至200ml.
标准品溶液的配制实验当日,按降钙素标准品的标示效价,用上述溶剂,按高、低剂量组(ds2、ds1)配成2种浓度的标准品溶液。一般高浓度标准品溶液的浓度控制在60~100mIU/ml.高低浓度的比值(r)不得大于3∶1.
供试品溶液的配制按供试品中降钙素的标示量或估计效价(AT),依标准品溶液的配制法配成高、低(dT2、dT1)2种浓度的供试品溶液,其浓度之比值(r)应与标准品相等,供试品与标准品各剂量组所致反应平均值应相近。
检查法来源:考试大
取健康合格、体重40~250g、同一性别、同一来源的大鼠。一次实验所用大鼠体重相差不超过20g,实验前禁食16小时,自由饮用蒸馏水,按体重随机分成4组,分别为标准品高、低剂量组和供试品高、低剂量组,每组不少于5只。将各组动物称重并编号,分别按体重给各组动物于腹部皮下注射相应浓度的标准品或供试品溶液,给药体积为0.4ml/100g体重。注射后每只准确计时1小时,然后按给药前后顺序分别自眼静脉丛取血。用适宜的方法,如邻甲酚酞络合剂测定血钙值。按“生物检定统计法”(附录ⅪⅤ)中量反应平行线测定法计算效价及实验误差。
本法的可信限率FL(%)不得大于45%。