本法系比较肝素标准品（S）与供试品（T）延长新鲜兔血或猪、兔血浆凝结时间的程度，以测定供试品的效价。
肝素标准品溶液的配制精密称取肝素标准品适量，按标示效价加0.9％氯化钠溶液溶解使成几种不同浓度的溶液，相邻两种浓度每1ml中所含肝素单位数相差应相等，且不超过5个单位，一般可配成每1ml中含85、90、95、100、105、110、115、120、125等单位的溶液。供试品溶液的配制供试品如为粉末，精密称取适量，按干燥品计算，加0.9％氯化钠溶液溶解使成每1ml中含1mg的溶液。供试品如为注射液，则按标示量加0.9％氯化钠溶液稀释至同样浓度。血浆的制备按肝素生物检定法中血浆制备法制备（附录ⅫD）。
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取管径均匀（0.8×3.8cm）清洁干燥的小试管8支，第1管和第8管为空白对照管，加入0.9％氯化钠溶液0.2ml，第2～7管为供试品管，每管均加入供试品溶液0.1ml，再每管分别加入上述一种浓度的肝素标准品稀释液0.1ml，立即混匀。取刚抽出的兔血适量，分别加入上述8支试管内，每管0.8ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，将小试管置37±0.5℃恒温水浴中，从采动物血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过2分钟；如用血浆，则分别于上述各管中加入0.7ml的血浆，置37±0.5℃恒温水浴中预热5～10分钟，每管分别加入1％氯化钙溶液0.1ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间。观察并记录各管凝结时间。结果判断
两支对照管的凝结时间相差不得超过1.35倍。在供试品管的凝结时间不超过两支对照管平均凝结时间150％的各管中，以肝素浓度最高的一管作为终点管。同样重复5次，5次试验测得终点管的肝素浓度，相差不得大于10个单位。5次结果的平均值，即为硫酸鱼精蛋白供试品（干燥品）1mg中和肝素的单位数。
