止喘胶囊提取工艺的优化研究

　　止喘胶囊系我院根据吴银根教授的经验方所制定的自制制剂。本方主要有淫羊藿和蛇床子等药味组成，具有补脾肾、祛痰湿作用，用于治疗慢性支气管炎、肺气肿、缓解期的支气管哮喘等疾病。本方原为汤剂，在我院已有500 余例临床观察。为便于服用和携带方便，将该方制成胶囊。本研究拟采用正交设计方法，以方中有效成分淫羊藿苷作为考核指标，对其提取工艺进行优化。 1 仪器与试药 1.1 仪器日本岛津公司SHIMADZU 高效液相色谱仪，LC- 10ATVP 泵，CTO- 10ASVP 柱温箱，SCL- 10AVP系统控制器，SPD-M10AVP 检测器，UV- 2450 分光光度计，BS- 110 型分析天平，Kromasil 柱。 1.2 试药甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。使用前所有试剂均经过孔径0.45μm的微孔滤膜滤过；所用药材均购于上海徐汇中药饮片厂，并经上海市药检所吴赵云教授鉴定。淫羊藿为小檗科（Berberidaceae）柔毛淫羊藿的全草。对照品淫羊藿苷由中国药品生物制品检定所提供（批号：0737 -200117）。 2 试验方法 2.1 色谱条件色谱柱: Kromasil C18（250 mm×4.6mm，5 μm）；检测波长为270 nm；柱温:35℃。溶剂系统：采用甲醇- 1.25%醋酸溶剂系统进行梯度洗脱。流动相：0.00~14.00 min 时，醋酸水（0.5 ∶39.5）∶甲醇= 43 ∶57；14.01~25.00 min 时，醋酸水（0.5 ∶39.5）∶甲醇=57 ∶43，流速均为1.0 ml/min。 2.2 对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品于棕色量瓶中，用甲醇配制成浓度为0.1140 μg/μl 的淫羊藿苷对照品溶液。 2.3 样品溶液的制备正交设计实验所得到的浸膏适量，用甲醇溶解、稀释、滤过，再用甲醇配制成一定浓度的样品溶液。 2.4 淫羊藿阴性样品的制备取组方中缺淫羊藿的其他药材，按提取淫羊藿苷的最佳工艺（A2B1C2）方法制备成淫羊藿阴性样品溶液。 2.5 淫羊藿苷含量测定参照药典及有关文献[1～3]，分别吸去上述阴性样品溶液、对照溶液、样品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，计算样品中淫羊霍苷含量。 2.6 正交试验方案提取淫羊藿苷的方法采用传统的水煎法：提取，过滤，合并滤液，浓缩，真空干燥得粉末，计算浸膏得率，并测定淫羊霍苷含量。选择煎煮次数、煎煮时间及加水量为三因素，进行三因素三水平L9（34）正交试验，以浸膏得率和淫羊霍苷含量为指标，优选提取工艺。 2.7 验证试验采用正交试验结果所得最佳提取工艺，进行3 批验证实验。 3 结果 3.1 各组淫羊霍苷HPLC 色谱图比较结果表明，该方法专属性良好，阴性对照无干扰。 3.2 正交试验结果结合方差分析和干浸膏得率实验结果，表明煎煮次数对提取效果有极显著影响，煎煮时间和加水量无显著影响。最佳提取工艺为：A2B1C2，即加10 倍量的水，煎煮2 次，每次0.5 h. 3.3 验证实验验证实验结果表明，所选提取工艺条件稳定，重现性好，为最佳提取工艺. 4 讨论本研究对组方中有效成分淫羊藿苷和蛇床子素分别采用了不同溶剂系统和不同提取方法，正交试验结果表明，提取淫羊藿苷的优化工艺条件为：加10 倍量的水，煎煮2 次，每次0.5 h。本研究采用二极阵列管检测器（DAD）测定淫羊藿苷含量，方法简单易行。本制剂的提取方法由于同时采用了水提取法和醇提法工艺，虽较复杂，但它最大限度地提取了药物的有效成分，在保证疗效方面比单一提取法好。