升麻配方颗粒的制备工艺和质量控制研究

　　升麻为毛茛科植物大三叶升麻Cim icifuga hera2 cleifolia Kom. 、兴安升麻C. dahurica ( Turcz. ) Max2im或升麻C. foetida L. 的干燥根茎[ 1 ] 。升麻配方颗粒是升麻饮片经水提、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药配方颗粒剂。文献报道升麻中含有异阿魏酸、阿魏酸及其他三萜化合物、香豆素等成分[ 2 ] 。异阿魏酸具有抗炎、镇痛等作用,为本品主要成分之一[ 3 ] ,《中国药典》2005年版将测定异阿魏酸作为评价升麻质量优劣的指标。本实验采用符合《中国药典》2005年版规定的升麻,对升麻配方颗粒的制备工艺及质量标准进行研究。 
　　1　仪器与试药　　美国HP 1100色谱仪Agilent公司, G1311A四泵, G1322A, G1314AVWD, HP Rev. A. 0501化学工作站; 美国TDL - 40B 高速离心机ANKE公司;KQ218型超声清洗器,昆山市超声仪器有限公司;DZG - 401电热真空干燥箱,天津天宇实验仪器公司; Sartorius BS210S型电子天平,天津奥特赛恩斯仪器有限公司。
　　甲醇为色谱纯,水为二次重蒸水,乙醇、糊精等其他试剂均为分析纯。升麻饮片为天津中药饮片厂提供的5 kg塑封包装升麻饮片,经高文远教授鉴定,符合《中国药典》2005年版要求;异阿魏酸对照品(批号077329810)购于天津药品检验所。
 　　2　方法与结果 2. 1　升麻配方颗粒制备工艺优选　　由于单味中药配方颗粒是单味中药饮片经水提(水蒸气提) 、浓缩、干燥、制粒而成颗粒,因此本实验的制备工艺中的提取溶剂确定为水。异阿魏酸为酚酸类成分,具有良好的水溶性。预实验取升麻饮片10 g,加12倍量水微沸回流1 h后过滤,滤渣再次回流, 合并所得滤液, 参照《中国药典》一部(2005年版)附录V ID高效液相色谱法测定提取液中和原饮片中异阿魏酸含量,计算异阿魏酸提取率大于80% ,得膏率大于25%。预实验证明在此基础上设计正交试验可达到预期效果。
　　 2. 1. 1　试验因素水平　根据升麻中主要有效成分异阿魏酸的水溶性及预试验结果,确定以异阿魏酸的转移率和得膏率为指标,以加水量、提取时间、提取次数进行正交试验,选择L9 ( 34 )正交表,对水提工艺的各参数进行考察,因素水平表如表1。(表略) 2. 1. 2　异阿魏酸转移率考察　样品溶液的制备:按照正交设计方案,分别称取9份升麻饮片,各25 g,分别加入相应倍量的自来水,微沸回流提取,过滤,合并滤液,摇匀。从中取5 mL,通过0122μm微孔滤膜滤过,弃去初滤液,即得。
　　另取升麻饮片适量,粉碎,取粉末(过二号筛)约0.25 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入10 %乙醇25 mL,称定重量。加热回流2.5 h,放冷,再称定重量,用10%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得升麻供试品溶液。　　对照品溶液制备[ 1 ] :精密称取异阿魏酸对照品9.21 mg,置50 mL棕色量瓶中,用10%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1 mL,置10 mL棕色量瓶中,加10%乙醇至刻度,摇匀,即得(每1 mL含异阿魏酸18.42μg) 。色谱条件: Cosmosil C18-MS-Ⅱ 色谱柱(4.6 mm ×250 mm, 5μm) ;流动相甲醇-0.1%乙酸 (30∶70) ;检测波长316 nm;柱温30 ℃。测定结果:高效液相法分别测定9次试验提取液中异阿魏酸的含量和升麻饮片中所含异阿魏酸含量,计算其转移率,结果见表2所示,方差分析见表3。(表略)由直观分析可知,各因素对异阿魏酸提取率的影响程度依次为C >B >A。 2. 1. 3　得膏率考察　精密吸取9次正交试验所得提取液各5 mL, 60 ℃水浴蒸发,再在60 ℃真空干燥至恒重,计算得膏率。实验结果见表2,方差分析见表3。直观分析中,各因素对转移率的的影响次序为C >B >A;得膏率的影响次序是C > A >B ,得到的最佳条件是A3B3 C3。 2. 1. 4　最佳提取工艺的确定　由异阿魏酸提取率和得膏率的直观分析和方差分析综合评价, C因素(提取次数)为最主要因素,且最佳条件均为3 水平,即提取回流3 次; 对于A (加水量) 、B (提取时间)因素,虽然转移率和出膏率的直观分析最佳条件均为3水平,但由于转移率比出膏率相对重要,而且在转移率直观分析中, 2水平和3水平相差不多,从经济因素考虑,A, B 因素的最佳条件均为二水平;综合得出最佳条件为10倍量水,微沸回流1.0h,回流3次。 2. 2　升麻配方颗粒的成型以升麻配方颗粒优选后的工艺,即取升麻饮片500 g,加10倍量水,微沸回流1 h,回流3次,合并3次提取液,水浴浓缩成稠浸膏,减压干燥至相对密度为1.32～1.39 (50～60 ℃)的干浸膏,按照质量比为1∶1的比例加入糊精,用75%的乙醇适量制成软材。软材过14号筛制成颗粒,干燥,整粒,即得升麻配方颗粒。 2. 3　升麻配方颗粒含量测定 2. 3. 1　色谱条件　见2. 1. 2。异阿魏酸分离色谱图见图1。(图略) 2. 3. 2　对照品溶液制备　见2.1.2。 2. 3. 3　供试品溶液的制备　将升麻配方颗粒磨成细粉,精密称取约0.25 g,置具塞锥形瓶中,精密加入10%乙醇25 mL,称定重量,水浴加热回流2.5 h,放冷,称定重量,用10%乙醇补足重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,取续滤液用0122 μm微孔滤膜滤过,备用。依照上述方法共制备5份供试品溶液。 2. 3. 4　线性关系考察　将异阿魏酸对照品溶液分别进样5, 7.5, 10, 12.5, 15μL,每次3针,以测得的平均峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线,得到异阿魏酸在0.092 1～0.276 3μg呈良好线性关系,标准曲线方程为Y = 4 974.473 26X , R =0.999 9。 2. 3. 5　精密度试验　将一份供试品溶液连续进样测定5 次,进样量10 μL,记录峰面积,测得RSD0.943% ( n = 5) 。 2. 3. 6　重复性试验　将5份升麻配方颗粒供试品溶液分别进样,每样连续进3次,进样量10 μL,测定供试品溶液中异阿魏酸,测得异阿魏酸平均含量为0.187% , RSD 1.06% ( n = 5) 。 2. 3. 7　日内稳定性试验　取一份升麻配方颗粒供试品溶液,每隔2 h进样一次,进样量10 μL,共5次,测定异阿魏酸含量,考察8 h内样品稳定性。测得RSD是0.566% ( n = 5) 。 2. 3. 8　加样回收率试验　精密称定5份升麻配方颗粒,以各样品中异阿魏酸含量的100%加入对照品,照2. 3. 3方法,制备5份升麻配方颗粒样品溶液。测定其中的异阿魏酸含量,进样量5 μL,测得平均加样回收率为9916%。RSD 1.81% ( n = 5) ,见表4。(表略) 2. 3. 9　升麻配方颗粒含量测定　分别精密称取3批升麻配方颗粒各0.5 g,照2. 3. 3项下制备供试品溶液。照测定法色谱条件测定,进样量10μL,计算异阿魏酸含量,结果见表5。 3　讨论 3. 1　提取溶剂的选择　异阿魏酸是升麻的主要有效成分之一,并且《中国药典》2005年版将其作为评价升麻质量优劣的指标成分,虽然它属于酚酸类成分,有许多文章中报道是在乙醇中大量提取得到的[ 4 ] ,但考虑到颗粒剂的实际工业生产经济因素和颗粒剂是与传统汤剂作对比研制的改变剂型的新药,作者的实验中采取水作为提取溶剂,异阿魏酸提取率在80%以上,得膏率为20%以上。既保证了配方颗粒中异阿魏酸含量又能尽可能地保证其他水溶性成分较多,是较合适的提取方法。 3. 2　正交试验因素的确定　正交试验因素选用的是加水量,提取时间,提取次数3个因素,在实验结果中,从异阿魏酸的转移率和得膏率的方差分析看,3个因素都没有显著性影响。在预试验中,作者试过以升麻的粉碎粒度为1个因素,并且此因素对异阿魏酸的转移率有显著性影响。但是本课题为了保持与传统汤剂一致,要求不能将粉碎粒度作为影响因素考虑。而且课题要求的转移率测定方法以药典为准,药典是针对药材而言,配方颗粒与药材还是不一样的,或许药典方法并不适合配方颗粒。所以,升麻配方颗粒还有待于进一步深入研究。 3. 3　工艺指标的确定　在许多正交优化试验中,当有2项评价指标时往往采取两项指标加权评分的方法确定最佳工艺,该方法在两项指标变化趋势情况不一致时显出它的优越性,但两项指标的权重比并没有权威理论的指导,完全是经验确定的,因为针对不同类药材,药典中规定的药理活性成分和总体提取物(得膏)二者对最终产品药效的影响孰大孰小不能一概而论。在本实验中没有引入权重的概念,因为提取率和得膏率两项指标的变化趋势是一致的,意即有利于异阿魏酸提取率的提取工艺,其得膏率也较高。因此最终选择上述最佳工艺。 3. 4　升麻配方颗粒中异阿魏酸含量的规定　根据文献得知不同产地的升麻中异阿魏酸含量的差距很大,从0.10% ～0.36%不等[ 3 ] 。因此以不同产地的饮片作为原料生产制得的配方颗粒中异阿魏酸的含量也会参差不齐。制定完善的含量控制标准是保证升麻配方颗粒质量的重要手段。本实验中,原料药材的异阿魏酸含量经测定为0.214% , 3批样品测定结果表明,异阿魏酸含量均在0.180%以上,本制备工艺最终异阿魏酸的转移率约为84% ,提取工艺中得膏率约为2512% ,因此,按照理论折算,升麻配方颗粒与升麻原料药材中的异阿魏酸含量应基本持平,实际实验得出数据与理论折算相符合。药典规定升麻中异阿魏酸含量不应低于0.10%。因此暂规定本品中异阿魏酸含量不少于118 mg·g- 1。 3. 5　存在的问题　本实验在课题的要求下,对升麻饮片用水做溶剂在微沸状态下提取了1 h后制成配方颗粒,但是有效成分异阿魏酸很不稳定,见光遇热会分解,虽然产品中异阿魏酸的含量超过了药典所规定,但不排除其他成分转化的贡献,至于是否有其他成分的损失,配方颗粒究竟与原饮片孰优孰劣,还有待于进一步的深入研究。