第二节 鉴别实验
母核和结构的呈色反应、沉淀反应、制备衍生物测定熔点、水解产物的反应、薄层色谱法、紫外分光光度法、红外分光光度法等都是鉴别甾体激素药物常用的方法。
一、呈色反应
（一）与强酸的呈色反应
硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，硫酸为主。可能机制为浓硫酸与甾体的酮基质子化反应，形成正碳离子，然后与HSO4-作用。
特点：操作简便，反应灵敏，通过形成的颜色或荧光的不同而互相区别，但操作条件不易掌握。
（二）官能团的呈色反应
1.C17-α-醇酮基 有还原性，能与氧化剂四氮唑盐反应显色。（可做薄层的显色剂）；
2.酮基 C3-、C20-能与2，4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼等羰基试剂反应呈色。
3.甲酮基以及活泼亚甲基 能与亚硝铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛类反应呈色。
4.有机氟 经氧瓶燃烧后生成无机氟化物，在与茜素蓝及硝酸亚铈呈色；
5.酚羟基 能与重氮磺酸反应生成红色偶氮染料。
二、沉淀反应
1.与斐林试剂 C17-α-醇酮基具有还原性，生成橙红色氧化亚铜沉淀。
2.氨基硝酸银 C17-α-醇酮基，黑色金属银沉淀
3.硝酸银 炔雌醇、炔诺酮，白色沉淀。
4.硝酸-硝酸银 有机氯破坏在酸性条件下，白色沉淀。
三、制备衍生物测定其熔点
生成酯、肟、缩氨基脲，或利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，然后测定其熔点。
1.酯的生成
2.酮肟的生成
3.缩氨基脲的生成
4.酯的水解
四、水解产物的反应
醋酸、戊酸和己酸酯水解后鉴别酸。
五、紫外分光光度法
C=C-C=O和C=C-C=C共轭系统，可用规定波长和吸收度比值法鉴别。
六、红外分光光度法
结构复杂，各国药典几乎均采用红外分光光度法鉴别，中国药典95版。36种原料，其中33种采用该法。
七、薄层色谱法
简便、快速、分离效能高等特点。
方法：
供试品溶液和对照品溶液的制备 供试品通常需做前处理（如有机溶剂提取），消除注射液、片剂及软膏剂考，试大收集整理等辅料的干扰。将处理好的供试品和对照品用规定溶剂配成一定浓度的溶液备用。
展开与检出 将供试品与对照品在同一块薄层板上分别点样，用规定的展开剂展开，取出晾干，用规定的显色剂显色，立即检视。供试品溶液所显斑点与对照品溶液所显斑点的Rf值相同。
部分甾体类药物的薄层色谱条件归纳见表
八、高效液相色谱法
保留时间一致鉴别。
