高效液相色谱法
1、 基本原理:影响柱效的主要因素是涡流扩散和传质阻抗。来源:考试大
分类:
1、液固吸附色谱法:流动相为液体,固定相是固体吸附剂。
2、液--液分配色谱法:固定相几乎全是化学键合硅胶,又称化学键合相色谱法。按固定相和流动相的极性2又分:正相色谱法和反相色谱法正相色谱法:流动相极性小于固定相极性的色谱法。用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质,用于含有不同官能团物质的分离。 极性弱组分先流出反相色谱法:……………大于……………………… 用于分离非极性至中等极性的分子型化合物来源:考试大
2、 高效液相色谱仪:
1、高压输液泵
2、色谱柱
3、进样阀
4、检测器:紫外吸收检测器、荧光检测器、差示折光检测器、电化学检测
中国药典2000对高效液相色谱法规定:除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意更改外,其余均可适当改变,色谱图于20min内记录完毕。
电泳法
电泳法:在电场的作用下,依据各组分之间淌度的不同实现分离的方法。分离程度取决于淌度之差。
一、基本原理: 电泳迁移速度为: :电泳淌度 :电场强度
影响电泳分离的条件:1、缓冲液的PH值和离子强度 2、电场强度 3、样品浓度
二、电泳仪:
3、 各类电泳法:
(1)、纸电泳法
(2)、醋酸纤维素电泳法:主要用于测定蛋白质相对百分含量来源:考试大
(3)、琼脂糖凝胶电泳法:
(4)、聚丙烯酰胺凝胶电泳法来源:考试大
(5)、SDS聚丙烯胺凝胶电泳法:测定蛋白质的分子量四、毛细管电泳法简介:以弹性石英毛细管为分离通道,高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离的分析方法。