甾体激素类药物的分析
☆ ☆☆☆考点1：醋酸地塞米松及其制剂的分析
1．结构及性质
醋酸地塞米松属肾上腺皮质激素，其结构如下：
醋酸地塞米松A环的C1、C2间，C4、C5间各有一个双键，并与C3上的酮基形成共轭体系，所以有紫外吸收；C17上为α-醇酮基的醋酸酯，α-醇酮基具有还原性；C10、C13具有角甲基，C11上有羟基。
2．鉴别
（1）与碱性酒石酸铜试液的反应。皮质激素的C17-α-醇酮基具还原性，与斐林试剂反应生成橙红色氧化亚铜沉淀，《中国药典》据此对本品进行鉴别。
取本品约10mg，加甲醇1ml，微温溶解后，加热的碱性酒石酸铜试液1ml，即生成红色沉淀。
（2）与硫酸的反应。本品为甾体激素的醋酸酯，可在碱性条件下先行水解生成醋酸，再于硫酸存在条件下与乙醇发生酯化反应，生成醋酸乙酯，具香气，可进行鉴别。
取本品50mg，加乙醇制成氢氧化钾试液2ml，置水浴中加热5分钟，放冷，加硫酸溶液（1→2）2ml，缓缓煮沸一分钟，即发生醋酸乙酯的香气。
（3）有机氟化物的反应。本品结构中含有氟，照《中国药典》附录“一般鉴别试验”中“有机氟化物”的鉴别方法鉴别。
鉴别方法：取供试品约7mg，用氧瓶燃烧法进行有机破坏，用水20ml与0.01mol/L氢氧化钠溶液65ml为吸收液，俟燃烧完毕后，振摇使吸收；取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色。
有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏后，生成F-，在pH4.3的醋酸-醋酸钠缓冲液中，可与茜素氟蓝试液和Ce3+形成蓝紫色水溶性配合物，以供鉴别。
（4）红外光谱法。《中国药典》采用红外光谱法鉴别本品，用溴化钾压片，主要的特征峰如下：
《中国药典》要求，本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
3．特殊杂质检查
（1）其他甾体。取本品，加氯仿-甲醇（9：1）制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加氯仿-甲醇（9：1）稀释成每1ml中含0.20mg的溶液，作为对照溶液，进行薄层色谱试验。分别取上述两种溶液各5μl，点于同一硅胶G薄层板上，用二氯甲烷-醋酸甲酯-水（100：50：50）的下层液为展开剂，展开后晾干，喷以碱性四氯唑蓝试液。供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
本法为高低浓度对比法，显色剂四氯唑蓝为氧化剂，常作为皮质激素类药物的显色剂，四氯唑蓝可被C17上α-醇酮基还原为蓝色甲腊而显色。
（2）硒。由于本品在合成过程中使用二氯化硒脱氢，硒对人体有剧毒，需进行检查。按《中国药典》附录“硒检查法”检查。有机药物首先经氧瓶燃烧破坏，药物中的硒转变为Se6+，在吸收液中加盐酸羟胺，使Se6+还原为Se4+，在pH2.0的条件下，与2，3-二氨基萘反应，生成4，5-苯并苯硒二唑，用环己烷提取后，于378nm波长处测定吸收度，与对照品比较后测定含量。本品中硒的限度为0.005%。
4．含量测定
（1）醋酸地塞米松的含量测定。采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（70：30）为流动相；检测波长为240nm。甲睾酮（0.2mg/ml）作内标。
测定方法：取醋酸地塞米松对照品约13mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇35ml溶解，用水稀释到刻度，摇匀；精密量取此溶液和内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；取20μl注入色谱仪，记录色谱图；另取本品适量，同法测定，按内标法以峰面积计算醋酸地塞米松含量。
（2）醋酸地塞米松片的含量测定。采用分光光度法测定片剂的含量。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于醋酸地塞米松7.5mg），置100ml量瓶中，加乙醇75ml，置50～60℃的水浴中保温10分钟，并时时振摇使样品溶解，放冷至室温，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，置另一100ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，在240nm波长处测定吸收度，按醋酸地塞米松的吸收系数（E1%1cm）为357计算含量。
式中，A--测定的吸收度值；W--样品的称样量，g； --平均片重，g。
（3）醋酸地塞米松注射液的含量测定。醋酸地塞米松注射液采用四氮唑比色法测定含量，皮质激素类药物的C17-α-醇酮基具有还原性，在强碱性条件下可以还原四氮唑盐成有色甲（TTC），从而采用比色法测定含量。氯化三苯四氮唑（TTC），其还原产物为红色的三苯甲，在485nm处有最大吸收，常用于皮质激素类药物制剂的含量测定。
测定方法：精密称取醋酸地塞米松对照品25mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液；取本品，摇匀，精密量取适量（约相当于醋酸地塞米松25mg），置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，取续滤液得供试品溶液；精密量取醋酸地塞米松的对照品溶液和供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃的暗处放置40～50分钟，照分光光度法，在485nm波长处分别测定吸收度，计算，即得。
含量测定结果的计算公式为：
式中，AX，AR--供试品溶液和对照品溶液的吸收度；CR--对照品溶液的浓度，mg/ml；V--样品的取样量，ml。
