☆ ☆☆考点5：地西泮的分析
1．结构及性质
地西泮是应用广泛的一类抗焦虑、抗惊厥药，分子结构中均具有苯骈二氮杂 环。结构如下：
二氮杂 环上的氮原子具有碱性，所以可以和某些有机碱沉淀剂反应产生沉淀，还可以用非水溶液滴定法测定含量。
本类药物具有较长的共轭体系，所以有紫外吸收，溶解于硫酸后在365nm紫外光下可显不同颜色的荧光。
地西泮C7上均有氯原子取代。
2．鉴别
（1）和硫酸的反应。地西泮溶解于硫酸后，在紫外光（365nm）下呈黄绿色的荧光，可供鉴别。
（2）氯元素的反应。地西泮C7上有氯原子取代。氯原子与母核以共价键相连，不能直接鉴别。首先用氧瓶燃烧法破坏，使有机结合的氯转化为Cl-，用5%的氢氧化钠溶液吸收，加硝酸酸化后，显氯化物的鉴别反应。
（3）紫外分光光度法。本类药物有较强的紫外吸收，可采用紫外分光光度法进行鉴别。《中国药典》规定，地西泮加0.5%硫酸的甲醇溶液，稀释制成每1ml中含5μg的溶液，在242nm、284nm和366nm的波长处应有最大吸收，且在242nm波长处的吸收度约为0.51，在284nm波长处的吸收度约为0.23。
（4）红外光谱法。规定样品的红外吸收光谱应与标准的图谱一致，
3．有关物质检查
（1）地西泮中有关物质的检查。地西泮在合成过程中，N1甲基化不完全时，可产生去甲基安定杂质，分解则可产生2-甲氨基-5-氯二苯酮。其结构为：
国内外药典均规定检查以上杂质。《中国药典》用薄层色谱法按高低浓度对比法检查，
检查方法：取本品，加丙酮制成每1ml中含100mg溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加丙酮稀释成每1ml中含0.3mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯-己烷（1：1）为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
以上方法用于原料药和片剂中有关物质的检查。
（2）地西泮注射液中分解产物的检查。地西泮注射液中的分解产物主要为2-甲氨基-5-氯二苯酮等。本品采用高效液相色谱法测定含量，所以在含量测定的条件下，采用主成分自身对照法检查分解产物。
检查方法：取供试品，加甲醇分别稀释制成每1ml中含1mg的供试品溶液和每1ml含5μg的对照溶液，在含量测定的色潜条件下，分别取两种溶液各10μl进样，记录色谱图至主峰保留时间的4倍，供试品溶液主成分峰后如显杂质峰，其面积之和不得大于对照溶液主成分的峰面积。
4．含量测定
（1）非水溶液滴定法
本类药物二氮杂 环上氮原子有弱碱性，原料药多用非水溶液滴定法测定。由于药物的结构和碱性强弱的不同，所以所用溶剂、指示剂及终点的颜色也有所不同。
测定方法：取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸与醋酐各10ml使溶解，加结晶紫指示剂1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显绿色，每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于28.47mg的地西泮（C16H13ClN2O）。
（2）紫外分光光度法
地西泮片和氯氮 片均采用紫外分光光度法测定含量。
（3）高效液相色谱法
地西泮注射剂处方中有苯甲酸、苯甲酸钠等附加剂，可干扰紫外分光光度法测定，所以《中国药典》采用高效液相色谱法测定其含量。
测定方法：色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（70：30）为流动相；检测波长为254nm。理论塔板数按地西泮峰计算应不低于1500，地西泮峰和内标物质峰的分离度应大于1.5。
内标溶液的制备：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定方法：取地西泮对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。吸取5.10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品适量（约相当于地西泮5mg），同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。
以上方法为反相高效液相色谱法，在此色谱条件下药物和分解产物、附加剂等可完全分离。以萘为内标，用内标法加校正因子测定地西泮含量。
☆ ☆考点6：氯氮卓的分析
1．结构及性质
氯氮 是应用广泛的一类抗焦虑、抗惊厥药，分子结构中均具有苯骈二氮杂 环。结构如下：
二氮杂 环上的氮原子具有碱性，所以可以和某些有机碱沉淀剂反应产生沉淀，还可以用非水溶液滴定法测定含量。
本类药物具有较长的共轭体系，所以有紫外吸收，溶解于硫酸后在365nm紫外光下可显不同颜色的荧光。
氯氮 C7上均有氯原子取代。
2．氯氮 的鉴别
（1）水解后的重氮化-偶合反应。氯氮 在酸性条件下加热，C2上的甲氨基水解产生羰基，进一步水解，生成二苯甲酮衍生物，具有芳伯氨基，与亚硝酸钠溶液和碱性β-萘酚试液发生重氮化-偶合反应，产生橙红色沉淀。
《中国药典》采用此法鉴别氯氮 。地西泮1位氮原子上有甲基取代，水解产物无芳伯氨基，不能发生重氮化-偶合反应。
（2）与碘化铋钾试液的反应。氯氮 二氮杂 环上氮原子有碱性，在盐酸酸性溶液中与碘化铋钾试液反应产生橙色沉淀。《中国药典》采用此反应鉴别氯氮 。
（3）紫外分光光度法。氯氮 有较强的紫外吸收，可采用紫外分光光度法进行鉴别。《中国药典》规定，氯氮 加盐酸溶液（9→1000）配成每1ml中含7μg的溶液，在245nm和308nm的波长处应有最大吸收。
3．含量测定
（1）非水溶液滴定法
本类药物二氮杂 环上氮原子有弱碱性，原料药多用非水溶液滴定法测定。由于药物的结构和碱性强弱的不同，所以所用溶剂、指示剂及终点的颜色也有所不同。
氯氮 用冰醋酸作溶剂，结晶紫作指示剂，用高氯酸滴定液滴定，至显蓝色为终点。
（2）紫外分光光度法
地西泮片和氯氮 片均采用紫外分光光度法测定含量。
氯氮 片的含量测定方法：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氯氮 30mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（0→1000）70ml，充分振摇使氯氮 溶解，用盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，用盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，在308nm的波长处测定吸收度，按C16H14ClN2O的吸收系数（E1%1cm）为319计算，即得。含量测定结果的计算公式为：
式中A--测得的吸收度；W--称样量，g； --平均片重，g。
