杂环类药物的分析
☆ ☆☆☆考点1：异烟肼的分析
1．结构及性质
异烟肼为抗结核药，其结构为：
异烟肼结构中吡啶环上的氮原子具有碱性，可以和某些重金属离子形成沉淀。γ位上有酰肼基取代，酰肼基有较强的还原性，可以和氨制硝酸银试液等氧化试剂反应，用于鉴别和含量测定。酰肼基还可以和某些含羰基的试剂发生缩合反应。
2．鉴别
（1）缩合反应。异烟肼的酰肼基可以和含羰基的试剂如芳醛发生缩合反应，其中和香草醛的反应如下：
异烟肼与香草醛反应，生成黄色的异烟腙，干燥后测定其熔点为228℃～231℃，熔融的同时分解。《中国药典》采用以上反应鉴别异烟肼。
（2）还原反应。异烟肼的酰肼基具有还原性，可还原硝酸银中的Ag+成单质银，肼基则被氧化生成氮气。
《中国药典》的鉴别方法为：取本品约10mg，置试管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸银试液lml，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。
（3）红外光谱法。要求本品的红外吸收光谱与对照的图谱一致。
3．游离肼的检查
异烟肼中的游离肼可由合成时的原料引入，也可在贮存过程中降解产生。肼是一种致癌物质，必须严格控制其含量。
《中国药典》采用薄层色谱法检查异烟肼原料药和注射剂中的游离肼。
检查方法：取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶液，作为对照溶液。吸取供试品溶液10μl与对照溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板上，以异丙醇一丙酮（3：2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15分钟后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
异烟肼斑点呈棕橙色，R1值约为0.21。游离肼斑点呈鲜黄色，Rf值约为0.3。本法以试验条件下不出现游离肼斑点为合格。肼的检测限为0.1μg，控制限量为0.02%。
4．含量测定
异烟肼分子中的酰肼基具有还原性，可采用氧化还原滴定法测定其含量。《中国药典》采用溴酸钾法测定，滴定反应为：
从以上滴定反应可以看出，1mol的溴酸钾相当于3/2mol的异烟肼。
测定方法：取本品约0.2g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取25ml，加水50ml、盐酸20ml与甲基橙指示剂1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失。每1ml的溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。
使用甲基橙作指示剂，终点时，溴酸钾氧化甲基橙使粉红色消失而指示终点。
每1ml溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于0.025mmol的异烟胼，即相当于异烟肼3.429mg（异烟肼的分子量为137.14）。
含量测定结果的计算公式为：
式中，V--消耗溴酸钾滴定液的体积，ml；C--溴酸钾滴定液的浓度，mol/L；W--称样量，g。
除原料药外，异烟肼的片剂、注射剂均采用溴酸钾法测定含量。
☆☆☆考点2：尼可刹米的分析
1．结构及性质
尼可刹米为中枢兴奋药，是白色或淡黄色的油状液体，其结构为：
尼可刹米分子结构中的吡啶环具有碱性，β位有酰胺基取代，酰胺基在碱性条件下水解，可释放出二乙胺气体。
2．鉴别
（1）戊烯二醛反应。此反应属吡啶环的开环反应。尼可刹米分子中的吡啶环与溴化氰反应，开环形成戊烯二醛的衍生物，再与苯胺缩合，形成黄色的希夫碱。
《中国药典》的鉴别方法为：取本品1滴，加水50ml，摇匀，分取2ml，加溴化氰试液2ml与2.5%苯胺溶液3ml，摇匀，溶液渐显黄色。
（2）水解反应。尼可刹米分子中的酰胺基在碱性条件下可水解，加氢氧化钠试液，加热，即有二乙胺逸出，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝。
（3）沉淀反应。尼可刹米分子中的吡啶环，可以和重金属离子反应。如尼可刹米和硫酸铜及硫氰酸铵作用，生成草绿色配位化合物的沉淀。《中国药典》收载了此鉴别反应。
3．有关物质的检查
尼可刹米中的有关物质主要是合成的副产物乙基烟酰胺。《中国药典》采用薄层色谱法检查。
检查方法：取供试品，加甲醇制成每1ml中含40mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液适量，加甲醇稀释为每1ml中含0.4mg和40μg的溶液，作为对照溶液（1）和（2），分别吸取以上溶液各10μl，点于硅胶GF254薄层板上，展开，晾干后，置254nm紫外灯下检视，供试品溶液中的杂质斑点允许有1点超过对照溶液（2），但不能超过对照溶液（1）的斑点。其余杂质斑点均不得超过对照溶液（2）的主斑点。
4．含量测定
（1）非水溶液滴定法。尼可刹米的吡啶环具有碱性，《中国药典》采用非水溶液滴定法测定尼可刹米原料药的含量。
测定方法：取本品约0.15g，精密称定，加冰醋酸10ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝绿色，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于17.82mg的C10HN2O。
（2）紫外分光光度法。采用紫外分光光度法测定尼可刹米注射剂的含量。
测定方法：用内容量移液管精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用0.5%硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，加0.5%硫酸溶液稀释成每1ml中约含尼可刹米20μg的溶液，在263nm的波长处测定吸收度，按C10H14N2O的吸收系数（E1%1cm）为292计算，即得。
注射剂的溶剂对非水溶液滴定法有干扰，所以采用本法测定。使用0.5%硫酸溶液溶解样品，是为了使药物呈离解状态，易溶于水。含量测定结果的计算公式为：
式上，A--测定的吸收度值；D--稀释倍数。
