☆ ☆☆考点2：青霉素V钾及其制剂的分析
1．结构
青霉素V钾也属青霉素类药物，其侧链为苯氧乙酰基，羧基做成钾盐，以增加药物的水溶性。青霉素V钾的结构如下：
2．鉴别
（1）水解反应。本品为羧酸的钾盐，显弱碱性，在青霉素酶的作用下，β-内酰胺环水解开环，生成羧酸，使溶液转为酸性，据此对药物进行鉴别。与青霉素酶的作用，专属性强。鉴别方法为：
取本品约10mg，加水10ml，振摇。使溶解，加0.1%中性红溶液0.5ml后，加0.01mol/L氢氧化钠溶液适量，使产生持久橙色，加200单位/ml青霉素酶溶液1ml后，溶液颜色即变为红色。
（2）紫外分光光度法。通过核对药物的λmax及两波长处的吸收度比值进行鉴别。取本品，加水溶解并制成每1ml中约含0.2mg的溶液，照分光光度法测定，在268nm及274nm的波长处有最大吸收，二者的吸收度比值应为1.20～1.25。
（3）红外光谱法。要求本品的红外吸收光谱应与对照的图谱一致。
（4）钾盐的火焰反应。照《中国药典》附录“一般鉴别试验”中钾盐的火焰反应进行鉴别。取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显紫色。
3．检查
（1）吸收度。取本品，加0.1mol/L氢氧化钠溶液制成每1ml中含1mg的溶液，照分光光度法测定，在306nm的波长处，其吸收度不得大于0.33；另取本品，用上述氢氧化钠溶液制成每1ml中含0.2mg的溶液，同法测定，在274nm的波长处，其吸收度不得小于0.50。
测定306nm处的吸收度，是为了控制杂质的量；测定274nm处的吸收度，则是为了控制药物的含量。
（2）水分。取本品，照水分测定法（费休法）测定，含水分不得超过1.5%。
4．含量测定
（1）青霉素V钾的含量测定。采用汞量法，方法与青霉素钠相同。
测定方法：取本品约50mg，精密称定，加水5ml溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，混匀，放置15分钟，加1mol/L。硝酸溶液5ml、醋酸盐缓冲液（pH4.6）20ml与水20ml，摇匀，照电位滴定法，用铂电极作为指示电极，汞-硫酸亚汞电极为参比电极，在35～40℃，用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）缓慢滴定，不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液的量。每1ml硝酸汞液（0.02mol/L）相当于7.77mg的总青霉素V钾（按C16H17KN2O5S计算）。
另取本品约0.25g，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）滴定，滴定终点判断方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.77mg的降解物（按C16H17KN2O5S计算）。
含量测定结果的计算方法同青霉素钠。
青霉素V钾（C16H17KN2O5S）与青霉素V（C16H18N2O5S）分子量之比为1：0.902。每1mg的青霉素V相当于1600青霉素V单位。根据青霉素V钾的含量，可计算出青霉素V的含量，进而计算出相当于青霉素V的效价。
（2）青霉素V钾片的含量测定。采用硫醇汞盐法。
原理：青霉素类抗生素在咪唑的催化下与氯化高汞能定量地反应转化成相应的青霉烯酸硫醇汞盐，在325nm波长处有最大吸收。
测定方法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于青霉素V 0.15g），置250ml量瓶中，加水150ml，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置25ml量瓶中，加咪唑溶液（取苯精制过的咪唑8.25g，加水60ml溶解后，加6mol/L盐酸溶液8.3ml，在搅拌下滴加0.27%二氯化汞溶液10ml，调节pH值至6.8±0.05，用水稀释至100ml，滤过）至刻度，摇匀，置60℃水浴中加热30分钟，取出放冷至室温，照分光光度法，在325nm的波长处测定吸收度，另取青霉素V对照品，同法测定，计算。
由于对照品为青霉素V，所以含量测定的结果是按青霉素V计算的结果。《中国药典》规定，本品含青霉素V（C16H17KN2O5S）应为标示量的90.0%～110.0%。
5．贮藏
《中国药典》规定，本品应遮光，密封，在凉暗处保存。
☆ ☆☆考点3：氨苄西林的分析
1．结构
氨苄西林也属青霉素类药物，其侧链为α-氨基取代的苯乙酰基，为半合成的抗生素。氨苄西林的结构如下：
2．鉴别
《中国药典》采用红外光谱法鉴别本品，要求本品的红外吸收光谱应与对照的图谱一致。
3．检查
（1）N，N-二甲基苯胺的检查。采用气相色谱法检查。
检查方法：色谱条件与系统适用性试验 以硅酮（OV-17）为固定相，涂布浓度为3%；柱温120℃；N，N-二甲基苯胺峰与内标峰的分离度应符合规定。
内标溶液的制备：精密称取萘适量，加环己烷溶解制成每1ml中约含50mg的溶液。
对照溶液的制备：取N，N-二甲基苯胺50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加盐酸2ml和水20ml振摇混匀后，加水稀释至刻度，摇匀。
测定方法：取本品约1.0g，精密称定，置具塞试管中，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，精密加入内标溶液1ml，强烈振摇，静置，取上层液2μl，注入气相色谱仪，记录色谱图；另精密量取对照溶液1ml，置具塞试管中，同法操作作为对照，按内标法以峰面积计算。含N，N-二甲基苯胺不得过百万分之二十。
用内标法测定，以萘为内标物质。制备供试品溶液时，加1mol/L氢氧化钠溶液溶解样品，加内标溶液（环己烷溶液）1ml，强烈振摇，药物结构中有羧基，溶解于水相中，杂质则被萃取至环己烷层，取有机相进样，药物不会干扰测定。
（2）水分。本品含3分子结晶水，理论含水量为13.4%。取本品，按水分测定法（费休氏法）测定，含水分应为12.0%～15.0%。
4．含量测定
《中国药典》采用高效液相色谱法测定本品的含量。
测定方法：色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈-1mol/L磷酸二氢钾溶液-1mol/L醋酸溶液（909:80:10:1）为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温30℃；检测波长254nm。理论塔板数按氨苄西林峰计算应不低于1000。
测定法取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液适量，超声处理使溶解后，再用上述稀释液稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氨苄西林对照品25mg，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中氨苄西林（C16H19N3O4S）的含量。
高效液相色谱法分离效能高，可分离药物中的杂质，专属性强。本法为外标法，含量测定结果的计算公式为：
式中，AX--供试品溶液中氨苄西林的峰面积；AR--对照品溶液中氨苄西林的峰面积；WR--对照品的称样量，mg；WX--供试品的称样量，mg。
5．贮藏
《中国药典》规定本品应遮光，严封，在凉处保存。
