第六章 分光光度法
第一节 紫外可见分光光度法
一、基本原理
紫外——可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。
波长长（频率小）的光线能量小，波长短（频率大）的光线能量大。
100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
X-射线 紫外区 可见区 红外区 微波区 无线电波区
Beer-lambert定律： A=E l c A——吸收度 E-吸收系数 l ——液层厚度 c——溶液浓度
吸收度浓度与厚度的关系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是单色光。
摩尔吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1mol/L ， 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。
百分吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1%（W/V） ， 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。
影响Beer定律因素：化学因素，光学因素
二、紫外——可见分光光度计： 主要部件：
1、 光源：要求光谱的光源，2、 氢灯和钨灯（350nm）
3、 单色器：进口狭缝、准直镜、色散元件（棱镜和光栅）、聚焦透镜和出口狭缝组成。
4、 吸收池：用光学玻璃制成的吸收池，5、 只能用于可见光区。用熔融石英（氧化硅），6、 可见紫外光区。
7、 检测器：光电池：（硒光电池：用于可见光；硅光电池：紫外可见光） 内阻小，8、 易疲劳。
光电管：内阻高，电流易放大 .
9、 讯号处理和显示器
三、定性与定量方法：
（一）定性鉴别：是多数有机化合物具有吸收光谱特征。一般用对比法。
1、对比吸收光谱特征数据 2、对比吸收度（或吸收系数）比值 3、对比吸收光谱的一致性
（二）纯度检查：杂质检查与杂质限量检测
（三）含量测定：
1、吸收系数法 2、标准曲线法 3、对照法
第二节 荧光分析法
荧光分析法：利用荧光的物理特性而进行定性与定量测定的方法。荧光法比紫外可见灵敏。
荧光光度计：激发光源、样品池、检测器、滤光片和单色器。
第三节 红外分光光度计
红外线：波长大于0.76um，小于500um的电磁波。 Hooke定律来描述分子的伸缩振动。
当分子的振动频率与入射的红外频率相同时，分子对红外产生吸收。伸缩振动和弯曲振动。
基频峰：分子吸收一定频率的红外线，振动能级由基态（V=0）跃迁至第一激发态时产生的吸收峰。
倍频峰：振动能级由基态跃至第二、三激发态。统称泛频峰。
吸收峰：用于鉴别官能团存在的吸收峰称特征吸收峰。
指纹区：1250-400cm （8.0-25um）的低频区称为指纹区。
红外分光光度计主要部件：光源、吸收池、单色器（棱镜和光栅）和检测器（真空热电偶）及记录装置。
